V prejšnjem projektu, v katerem so na Tajskem testirali lokalne obrate za predelavo hrane na komarje, so ugotovili, da imajo eterična olja (EO) vrste Cyperus rotundus, galangala in cimeta dobro delovanje proti komarjem Aedes aegypti. V poskusu zmanjšanja uporabe tradicionalnihinsekticidiin izboljšati nadzor nad populacijami odpornih komarjev, je bil cilj te študije ugotoviti potencialni sinergizem med adulticidnimi učinki etilen oksida in toksičnostjo permetrina za komarje vrste Aedes aegypti, vključno s sevi, odpornimi na piretroide, in občutljivimi sevi.
Oceniti kemijsko sestavo in ubijalno aktivnost EO, ekstrahiranega iz korenik C. rotundus in A. galanga ter lubja C. verum, proti občutljivemu sevu Muang Chiang Mai (MCM-S) in odpornemu sevu Pang Mai Dang (PMD-R). ) Aktivni odrasli Ae. Aedes aegypti. Na teh komarjih Aedes je bil izveden tudi biološki test mešanice EO in permetrina na odraslih, da bi razumeli njeno sinergistično aktivnost. sevi aegypti.
Kemijska karakterizacija z analitsko metodo GC-MS je pokazala, da je bilo iz encimov C. rotundus, A. galanga in C. verum identificiranih 48 spojin, ki predstavljajo 80,22 %, 86,75 % oziroma 97,24 % vseh sestavin. Ciperen (14,04 %), β-bisabolen (18,27 %) in cinamaldehid (64,66 %) so glavne sestavine olja ciperusa, olja galangala in balzamičnega olja. V bioloških testih ubijanja odraslih osebkov so bili encimi C. rotundus, A. galanga in C. verum učinkoviti pri ubijanju Ae. aegypti, vrednosti LD50 MCM-S in PMD-R pa so bile 10,05 in 9,57 μg/mg pri samicah, 7,97 in 7,94 μg/mg pri samicah ter 3,30 in 3,22 μg/mg pri samicah. Učinkovitost MCM-S in PMD-R Ae pri ubijanju odraslih komarjev *aegypti* v teh EO je bila blizu piperonil butoksidu (vrednosti PBO, LD50 = 6,30 oziroma 4,79 μg/mg pri samicah), vendar ne tako izrazita kot permetrin (vrednosti LD50 = 0,44 oziroma 3,70 ng/mg pri samicah). Vendar pa so kombinirani biološki testi pokazali sinergijo med EO in permetrinom. Pomemben sinergizem s permetrinom proti dvema sevoma komarjev *Aedes*. *Aedes aegypti* je bil opažen v EM *C. rotundus* in *A. galanga*. Dodatek olj *C. rotundus* in *A. galanga* je znatno zmanjšal vrednosti LD50 permetrina na MCM-S z 0,44 na 0,07 ng/mg oziroma 0,11 ng/mg pri samicah, z vrednostmi sinergijskega razmerja (SR) 6,28 oziroma 4,00. Poleg tega so emboli C. rotundus in A. galanga znatno znižali vrednosti LD50 permetrina na PMD-R s 3,70 na 0,42 ng/mg oziroma 0,003 ng/mg pri samicah, z vrednostmi SR 8,81 oziroma 1233,33.
Sinergijski učinek kombinacije EO in permetrina za povečanje toksičnosti za odrasle proti dvema sevoma komarjev vrste Aedes. Aedes aegypti kaže obetavno vlogo etilen oksida kot sinergista pri krepitvi učinkovitosti proti komarjem, zlasti tam, kjer so tradicionalne spojine neučinkovite ali neprimerne.
Komar Aedes aegypti (Diptera: Culicidae) je glavni prenašalec denge in drugih nalezljivih virusnih bolezni, kot so rumena mrzlica, čikungunja in virus Zika, kar predstavlja veliko in vztrajno grožnjo za ljudi [1, 2]. Virus denge je najresnejša patogena hemoragična mrzlica, ki prizadene ljudi, saj se letno pojavi od 5 do 100 milijonov primerov, ogroženih pa je več kot 2,5 milijarde ljudi po vsem svetu [3]. Izbruhi te nalezljive bolezni predstavljajo veliko breme za prebivalstvo, zdravstvene sisteme in gospodarstva večine tropskih držav [1]. Po podatkih tajskega ministrstva za zdravje je bilo leta 2015 po vsej državi zabeleženih 142.925 primerov denge in 141 smrtnih primerov, kar je več kot trikrat več kot leta 2014 [4]. Kljub zgodovinskim dokazom je komar Aedes dengo izkoreninil ali močno zmanjšal. Po zatiranju vrste Aedes aegypti [5] se je stopnja okužb močno povečala in bolezen se je razširila po vsem svetu, deloma zaradi desetletij globalnega segrevanja. Izločanje in zatiranje vrste Ae. Aedes aegypti je relativno težko, ker gre za domačega prenašalca komarja, ki se čez dan pari, hrani, počiva in odlaga jajčeca v in okoli človeških bivališč. Poleg tega se ta komar lahko prilagodi okoljskim spremembam ali motnjam, ki jih povzročajo naravni dogodki (kot je suša) ali človeški nadzorni ukrepi, in se lahko vrne na prvotno število [6, 7]. Ker so bila cepiva proti dengi odobrena šele pred kratkim in ni specifičnega zdravljenja za dengo, je preprečevanje in zmanjševanje tveganja prenosa denge v celoti odvisno od zatiranja prenašalcev komarjev in odprave stika ljudi z njimi.
Predvsem uporaba kemikalij za zatiranje komarjev ima zdaj pomembno vlogo v javnem zdravju kot pomemben sestavni del celovitega integriranega upravljanja prenašalcev. Med najbolj priljubljene kemične metode spada uporaba nizko strupenih insekticidov, ki delujejo proti ličinkam komarjev (larvicidi) in odraslim komarjem (adidocidi). Zatiranje ličink z zmanjševanjem virov in redno uporabo kemičnih larvicidov, kot so organofosfati in regulatorji rasti žuželk, velja za pomembno. Vendar pa škodljivi vplivi na okolje, povezani s sintetičnimi pesticidi, in njihovo delovno intenzivno in kompleksno vzdrževanje ostajajo velika skrb [8, 9]. Tradicionalno aktivno zatiranje prenašalcev, kot je zatiranje odraslih, ostaja najučinkovitejše sredstvo zatiranja med virusnimi izbruhi, saj lahko hitro in v velikem obsegu izkorenini prenašalce nalezljivih bolezni ter skrajša življenjsko dobo in dolgoživost lokalnih populacij prenašalcev [3]., 10]. Štirje razredi kemičnih insekticidov: organoklorini (imenovani le DDT), organofosfati, karbamati in piretroidi so osnova programov zatiranja prenašalcev, pri čemer piretroidi veljajo za najuspešnejši razred. So zelo učinkoviti proti različnim členonožcem in imajo nizko učinkovitost. toksičnost za sesalce. Trenutno sintetični piretroidi predstavljajo večino komercialnih pesticidov in predstavljajo približno 25 % svetovnega trga pesticidov [11, 12]. Permetrin in deltametrin sta piretroidna insekticida širokega spektra, ki se že desetletja uporabljata po vsem svetu za zatiranje različnih škodljivcev kmetijskega in medicinskega pomena [13, 14]. V petdesetih letih prejšnjega stoletja je bil DDT izbran kot kemikalija izbire za tajski nacionalni program zatiranja komarjev na področju javnega zdravja. Po široki uporabi DDT na območjih, endemičnih za malarijo, je Tajska med letoma 1995 in 2000 postopoma opustila uporabo DDT in ga nadomestila z dvema piretroidoma: permetrinom in deltametrinom [15, 16]. Ta piretroidna insekticida sta bila uvedena v začetku devetdesetih let prejšnjega stoletja za zatiranje malarije in denge, predvsem z obdelavo posteljnih mrež ter uporabo termalne megle in razpršil z ultra nizko toksičnostjo [14, 17]. Vendar pa so zaradi močne odpornosti komarjev in pomanjkanja javnega spoštovanja predpisov zaradi skrbi za javno zdravje in vpliv sintetičnih kemikalij na okolje izgubili učinkovitost. To predstavlja precejšnje izzive za uspeh programov zatiranja vektorjev grožnje [14, 18, 19]. Za večjo učinkovitost strategije so potrebni pravočasni in ustrezni protiukrepi. Priporočeni postopki upravljanja vključujejo zamenjavo naravnih snovi, rotacijo kemikalij različnih razredov, dodajanje sinergistov in mešanje kemikalij ali sočasno uporabo kemikalij različnih razredov [14, 20, 21]. Zato je nujno treba najti in razviti okolju prijazno, priročno in učinkovito alternativo ter sinergist, cilj te študije pa je odgovoriti na to potrebo.
Naravni insekticidi, zlasti tisti na osnovi rastlinskih sestavin, so pokazali potencial pri ocenjevanju trenutnih in prihodnjih alternativ zatiranju komarjev [22, 23, 24]. Več študij je pokazalo, da je mogoče zatirati pomembne prenašalce komarjev z uporabo rastlinskih proizvodov, zlasti eteričnih olj (EO), kot sredstev za uničevanje odraslih komarjev. Adulticidne lastnosti proti nekaterim pomembnim vrstam komarjev so bile ugotovljene v številnih rastlinskih oljih, kot so zelena, kumina, zedoarija, janež, cevasti poper, timijan, Schinus terebinthifolia, Cymbopogon citratus, Cymbopogon schoenanthus, Cymbopogon giganteus, Chenopodium ambrosioides, Cochlospermum planchonii, Eucalyptus ter eticornis, Eucalyptus citriodora, Cananga odorata in Petroselinum Criscum [25, 26, 27, 28, 29, 30]. Etilen oksid se zdaj uporablja ne le samostojno, temveč tudi v kombinaciji z ekstrahiranimi rastlinskimi snovmi ali obstoječimi sintetičnimi pesticidi, kar povzroča različne stopnje toksičnosti. Kombinacije tradicionalnih insekticidov, kot so organofosfati, karbamati in piretroidi, z etilen oksidom/rastlinskimi izvlečki delujejo sinergistično ali antagonistično v svojih toksičnih učinkih in so se izkazale za učinkovite proti prenašalcem bolezni in škodljivcem [31, 32, 33, 34, 35]. Vendar pa je bila večina študij o sinergističnih toksičnih učinkih kombinacij fitokemikalij s sintetičnimi kemikalijami ali brez njih izvedena na kmetijskih prenašalcih in škodljivcih žuželk in ne na medicinsko pomembnih komarjih. Poleg tega se je večina dela o sinergističnih učinkih kombinacij rastlinskih in sintetičnih insekticidov proti prenašalcem komarjev osredotočila na larvicidni učinek.
V prejšnji študiji, ki so jo avtorji izvedli kot del tekočega raziskovalnega projekta, ki je pregledoval intimicide iz avtohtonih rastlin za prehrano na Tajskem, so ugotovili, da imajo etilen oksidi iz Cyperus rotundus, galangala in cimeta potencialno aktivnost proti odraslim komarjem vrste Aedes. Egipt [36]. Zato je bil cilj te študije oceniti učinkovitost eteričnih olj, izoliranih iz teh zdravilnih rastlin, proti komarjem vrste Aedes. aegypti, vključno s sevi, odpornimi na piretroide in občutljivimi nanje. Analiziran je bil tudi sinergistični učinek binarnih mešanic etilen oksida in sintetičnih piretroidov z dobro učinkovitostjo pri odraslih, da bi zmanjšali uporabo tradicionalnih insekticidov in povečali odpornost proti vektorjem komarjev, zlasti proti Aedes. Aedes aegypti. Ta članek poroča o kemijski karakterizaciji učinkovitih eteričnih olj in njihovem potencialu za povečanje toksičnosti sintetičnega permetrina proti komarjem vrste Aedes. aegypti v sevih, občutljivih na piretroide (MCM-S), in odpornih sevih (PMD-R).
Korenine C. rotundus in A. galanga ter lubje C. verum (slika 1), ki se uporabljajo za ekstrakcijo eteričnega olja, so bili kupljeni pri dobaviteljih zeliščnih zdravil v provinci Chiang Mai na Tajskem. Znanstvena identifikacija teh rastlin je bila dosežena s posvetovanjem z g. Jamesom Franklinom Maxwellom, herbarijskim botanikom, Oddelka za biologijo, Fakultete za znanost, Univerze Chiang Mai (CMU), provinca Chiang Mai, Tajska, in znanstvenico Wannari Charoensap; na Oddelku za farmacijo, Fakultete za farmacijo, Univerze Carnegie Mellon, ga. Voucher, so primerki vsake rastline shranjeni na Oddelku za parazitologijo na Medicinski fakulteti Univerze Carnegie Mellon za prihodnjo uporabo.
Vzorci rastlin so bili posamično sušeni v senci 3–5 dni v odprtem prostoru z aktivnim prezračevanjem in sobno temperaturo približno 30 ± 5 °C, da se odstrani vlaga pred ekstrakcijo naravnih eteričnih olj (EO). Skupno 250 g vsakega suhega rastlinskega materiala je bilo mehansko zmletih v grob prah in uporabljenih za izolacijo eteričnih olj (EO) z destilacijo s paro. Destilacijska aparatura je bila sestavljena iz električnega grelnega plašča, 3000 ml bučke z okroglim dnom, ekstrakcijske kolone, kondenzatorja in naprave Cool ace (Eyela Cool Ace CA-1112 CE, Tokyo Rikakikai Co. Ltd., Tokio, Japonska). V bučko smo dodali 1600 ml destilirane vode in 10–15 steklenih kroglic, nato pa jo z električnim grelnikom segrevali na približno 100 °C vsaj 3 ure, dokler destilacija ni bila končana in ni več nastajal EO. EO plast smo ločili od vodne faze z lijakom ločilnim, posušili nad brezvodnim natrijevim sulfatom (Na2SO4) in shranili v zaprti rjavi steklenici pri 4 °C, dokler nismo pregledali kemične sestave in aktivnosti odraslih osebkov.
Kemijska sestava eteričnih olj je bila izvedena sočasno z biološkim testom za odraslo snov. Kvalitativna analiza je bila izvedena z uporabo sistema GC-MS, ki je bil sestavljen iz plinskega kromatografa Hewlett-Packard (Wilmington, Kalifornija, ZDA) 7890A, opremljenega z enim kvadrupolnim masnim selektivnim detektorjem (Agilent Technologies, Wilmington, Kalifornija, ZDA) in MSD 5975C (EI) (Agilent Technologies).
Kromatografska kolona – DB-5MS (30 m × notranji premer 0,25 mm × debelina filma 0,25 µm). Skupni čas delovanja GC-MS je bil 20 minut. Pogoji analize so bili, da sta temperaturi injektorja in prenosne linije 250 oziroma 280 °C; temperatura peči je nastavljena tako, da se povečuje s 50 °C na 250 °C s hitrostjo 10 °C/min, nosilni plin je helij; pretok 1,0 ml/min; volumen vbrizga je 0,2 µL (1/10 % prostornine v CH2Cl2, razmerje delitve 100:1); Za detekcijo z GC-MS se uporablja sistem za ionizacijo elektronov z ionizacijsko energijo 70 eV. Območje zajemanja je 50–550 atomskih masnih enot (amu), hitrost skeniranja pa 2,91 skeniranja na sekundo. Relativni odstotki komponent so izraženi kot odstotki, normalizirani glede na površino vrha. Identifikacija sestavin EO temelji na njihovem retencijskem indeksu (RI). RI je bil izračunan z uporabo enačbe Van den Doola in Kratza [37] za serijo n-alkanov (C8-C40) in primerjan z retencijskimi indeksi iz literature [38] in knjižničnih podatkovnih baz (NIST 2008 in Wiley 8NO8). Identiteta prikazanih spojin, kot sta struktura in molekulska formula, je bila potrjena s primerjavo z razpoložljivimi avtentičnimi vzorci.
Analitski standardi za sintetični permetrin in piperonil butoksid (PBO, pozitivna kontrola v sinergističnih študijah) so bili kupljeni pri podjetju Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, ZDA). Kompleti za testiranje odraslih Svetovne zdravstvene organizacije (WHO) in diagnostični odmerki papirja, impregniranega s permetrinom (0,75 %), so bili komercialno kupljeni pri Centru za nadzor vektorjev WHO v Penangu v Maleziji. Vse druge uporabljene kemikalije in reagenti so bili analitske kakovosti in so bili kupljeni pri lokalnih ustanovah v provinci Chiang Mai na Tajskem.
Komarji, uporabljeni kot testni organizmi v biološkem testu za odrasle, so bili prosto pareči laboratorijski komarji vrste Aedes aegypti, vključno z občutljivim sevom Muang Chiang Mai (MCM-S) in odpornim sevom Pang Mai Dang (PMD-R). Sev MCM-S je bil pridobljen iz lokalnih vzorcev, zbranih na območju Muang Chiang Mai v provinci Chiang Mai na Tajskem, in se od leta 1995 hrani v entomološki sobi Oddelka za parazitologijo Medicinske fakultete CMU [39]. Sev PMD-R, za katerega je bilo ugotovljeno, da je odporen na permetrin, je bil izoliran iz poljskih komarjev, prvotno zbranih v Ban Pang Mai Dang v okrožju Mae Tang v provinci Chiang Mai na Tajskem, in se od leta 1997 hrani v istem inštitutu [40]. Seve PMD-R so gojili pod selektivnim pritiskom, da bi ohranili raven odpornosti z občasno izpostavljenostjo 0,75 % permetrinu z uporabo kompleta za detekcijo WHO z nekaj spremembami [41]. Vsak sev Ae. Aedes aegypti so kolonizirali posamično v laboratoriju brez patogenov pri temperaturi 25 ± 2 °C, relativni vlažnosti 80 ± 10 % in fotoperiodi 14:10 ur svetlobe/teme. Približno 200 ličink so gojili v plastičnih pladnjih (dolgih 33 cm, širokih 28 cm in visokih 9 cm), napolnjenih z vodo iz pipe, z gostoto 150–200 ličink na pladenj in jih dvakrat na dan hranili s steriliziranimi pasjimi piškoti. Odrasle črve so gojili v vlažnih kletkah in jih nenehno hranili z 10 % vodno raztopino saharoze in 10 % raztopino multivitaminskega sirupa. Samice komarjev redno sesajo kri za odlaganje jajčec. Samice, stare od dva do pet dni, ki še niso bile hranjene s krvjo, se lahko neprekinjeno uporabljajo v eksperimentalnih bioloških testih na odraslih komarjih.
Biološki test odziva na odmerek in umrljivost EO je bil izveden na odraslih samicah komarjev Aedes aegypti, MCM-S in PMD-R z uporabo lokalne metode, spremenjene v skladu s standardnim protokolom SZO za testiranje občutljivosti [42]. EO iz vsake rastline je bil serijsko razredčen z ustreznim topilom (npr. etanolom ali acetonom), da se je dobila graduirana serija 4-6 koncentracij. Po anesteziji z ogljikovim dioksidom (CO2) so bili komarji individualno stehtani. Anestezirani komarji so bili nato negibni na suhem filtrirnem papirju na prilagojeni hladni plošči pod stereomikroskopom, da se prepreči ponovna aktivacija med postopkom. Za vsako zdravljenje je bilo na zgornji pronotum samice nanesenih 0,1 μl raztopine EO z uporabo ročnega mikrodozatorja Hamilton (700 Series Microliter™, Hamilton Company, Reno, NV, ZDA). Petindvajset samic je bilo tretiranih z vsako koncentracijo, pri čemer se je umrljivost gibala od 10 % do 95 % za vsaj 4 različne koncentracije. Komarji, tretirani s topilom, so služili kot kontrola. Da bi preprečili kontaminacijo testnih vzorcev, filtrirni papir zamenjajte z novim filtrirnim papirjem za vsak testirani EO. Odmerki, uporabljeni v teh bioloških testih, so izraženi v mikrogramih EO na miligram telesne teže žive samice. Aktivnost odraslih PBO je bila prav tako ocenjena na podoben način kot EO, pri čemer je bil PBO uporabljen kot pozitivna kontrola v sinergističnih poskusih. Tretirani komarji v vseh skupinah so bili nameščeni v plastične skodelice in jim je bila dana 10 % saharoze in 10 % multivitaminskega sirupa. Vsi biološki testi so bili izvedeni pri 25 ± 2 °C in 80 ± 10 % relativni vlažnosti ter ponovljeni štirikrat s kontrolami. Smrtnost med 24-urnim obdobjem vzreje je bila preverjena in potrjena z odsotnostjo odziva komarjev na mehansko stimulacijo, nato pa zabeležena na podlagi povprečja štirih ponovitev. Poskusne obdelave so bile za vsak testni vzorec ponovljene štirikrat z uporabo različnih serij komarjev. Rezultati so bili povzeti in uporabljeni za izračun odstotka smrtnosti, ki je bil uporabljen za določitev 24-urnega smrtnega odmerka s probit analizo.
Sinergistični anticidni učinek EO in permetrina je bil ocenjen z uporabo postopka lokalnega testa toksičnosti [42], kot je bilo opisano že prej. Za pripravo permetrina v želeni koncentraciji je bil uporabljen aceton ali etanol kot topilo, pa tudi binarna mešanica EO in permetrina (EO-permetrin: permetrin, pomešan z EO pri koncentraciji LD25). Testni kompleti (permetrin in EO-permetrin) so bili ocenjeni glede na seva MCM-S in PMD-R Ae. Aedes aegypti. Vsaka od 25 samic komarjev je prejela štiri odmerke permetrina, da bi preizkusili njegovo učinkovitost pri ubijanju odraslih, pri čemer je bil vsak tretma ponovljen štirikrat. Za identifikacijo kandidatov za sinergiste EO je bilo vsaki od 25 samic komarjev danih od 4 do 6 odmerkov EO-permetrina, pri čemer je bil vsak tretma ponovljen štirikrat. Tretma s PBO-permetrinom (permetrin, pomešan s koncentracijo PBO LD25) je služil tudi kot pozitivna kontrola. Odmerki, uporabljeni v teh bioloških testih, so izraženi v nanogramih testnega vzorca na miligram telesne teže žive samice. Za vsak sev komarjev so bile izvedene štiri eksperimentalne ocene na individualno vzrejenih serijah, podatki o umrljivosti pa so bili združeni in analizirani z uporabo programa Probit za določitev 24-urnega smrtnega odmerka.
Stopnja umrljivosti je bila prilagojena z Abbottovo formulo [43]. Prilagojeni podatki so bili analizirani z regresijsko analizo Probit z uporabo programa za računalniško statistiko SPSS (različica 19.0). Letalne vrednosti 25 %, 50 %, 90 %, 95 % in 99 % (LD25, LD50, LD90, LD95 in LD99) so bile izračunane z uporabo ustreznih 95-odstotnih intervalov zaupanja (95-odstotni IZ). Meritve pomembnosti in razlike med testnimi vzorci so bile ocenjene z uporabo testa hi-kvadrat ali Mann-Whitneyjevega U testa znotraj vsakega biološkega testa. Rezultati so bili ocenjeni kot statistično pomembni pri P< 0,05. Koeficient upornosti (RR) se oceni na ravni LD50 z uporabo naslednje formule [12]:
RR > 1 označuje odpornost, RR ≤ 1 pa občutljivost. Vrednost sinergijskega razmerja (SR) vsakega kandidata za sinergist se izračuna na naslednji način [34, 35, 44]:
Ta dejavnik deli rezultate v tri kategorije: vrednost SR 1 ± 0,05 velja za vrednost brez očitnega učinka, vrednost SR > 1,05 velja za vrednost s sinergističnim učinkom, vrednost SR pa za vrednost SR. Svetlo rumeno tekoče olje je mogoče dobiti z destilacijo s paro korenik C. rotundus in A. galanga ter lubja C. verum. Izkoristki, izračunani na suho težo, so bili 0,15 %, 0,27 % (m/m) in 0,54 % (v/v) w) (tabela 1). Študija kemične sestave olj C. rotundus, A. galanga in C. verum z GC-MS je pokazala prisotnost 19, 17 in 21 spojin, ki so predstavljale 80,22 %, 86,75 % oziroma 97,24 % vseh komponent (tabela 2). Spojine olja korenike C. lucidum so sestavljene predvsem iz ciperonena (14,04 %), sledijo mu karalen (9,57 %), α-kapselan (7,97 %) in α-kapselan (7,53 %). Glavna kemična sestavina olja korenike galangala je β-bisabolen (18,27 %), sledijo mu α-bergamoten (16,28 %), 1,8-cineol (10,17 %) in piperonol (10,09 %). Medtem ko je bil cinamaldehid (64,66 %) opredeljen kot glavna sestavina olja lubja C. verum, so bili cinamični acetat (6,61 %), α-kopan (5,83 %) in 3-fenilpropionaldehid (4,09 %) obravnavani kot manjše sestavine. Kemijske strukture ciperna, β-bisabolena in cinamaldehida so glavne spojine C. rotundus, A. galanga in C. verum, kot je prikazano na sliki 2.
Rezultati treh osebkov, ki so ocenili aktivnost odraslih komarjev proti komarjem vrste Aedes. Komarji vrste Aedes aegypti so prikazani v tabeli 3. Ugotovljeno je bilo, da imajo vsi EO smrtonosne učinke na komarje vrste MCM-S Aedes. Aedes aegypti. Najučinkovitejši EO je C. verum, sledijo mu A. galanga in C. rotundus z vrednostmi LD50 3,30, 7,97 in 10,05 μg/mg za samice MCM-S, kar je nekoliko več kot 3,22 (U = 1), Z = -0,775, P = 0,667), 7,94 (U = 2, Z = 0, P = 1) in 9,57 (U = 0, Z = -1,549, P = 0,333) μg/mg PMD-R pri ženskah. To ustreza nekoliko večjemu učinku PBO pri odraslih na PMD-R kot sev MSM-S, z vrednostmi LD50 4,79 oziroma 6,30 μg/mg pri samicah (U = 0, Z = -2,021, P = 0,057). Izračunamo lahko, da so vrednosti LD50 C. verum, A. galanga, C. rotundus in PBO proti PMD-R približno 0,98, 0,99, 0,95 oziroma 0,76-krat nižje od vrednosti proti MCM-S. To torej kaže, da je občutljivost na PBO in EO med obema sevoma Aedes relativno podobna. Čeprav je bil PMD-R bolj občutljiv kot MCM-S, občutljivost Aedes aegypti ni bila pomembna. Nasprotno pa se je občutljivost na permetrin aegypti med sevoma Aedes zelo razlikovala (tabela 4). PMD-R je pokazal znatno odpornost na permetrin (vrednost LD50 = 0,44 ng/mg pri ženskah) z višjo vrednostjo LD50 3,70 v primerjavi z MCM-S (vrednost LD50 = 0,44 ng/mg pri ženskah) ng/mg pri ženskah (U = 0, Z = -2,309, P = 0,029). Čeprav je PMD-R veliko manj občutljiv na permetrin kot MCM-S, je njegova občutljivost na PBO in olja C. verum, A. galanga in C. rotundus nekoliko višja kot pri MCM-S.
Kot je bilo opaženo v biološkem testu kombinacije EO in permetrina na odrasli populaciji, so binarne mešanice permetrina in EO (LD25) pokazale bodisi sinergijo (vrednost SR > 1,05) bodisi nobenega učinka (vrednost SR = 1 ± 0,05). Kompleksni učinki mešanice EO in permetrina na odrasle komarje na eksperimentalne albino komarje. Seva Aedes aegypti MCM-S in PMD-R sta prikazana v tabeli 4 in na sliki 3. Ugotovljeno je bilo, da dodatek olja C. verum nekoliko zmanjša LD50 permetrina proti MCM-S in nekoliko poveča LD50 proti PMD-R na 0,44–0,42 ng/mg pri ženskah oziroma s 3,70 na 3,85 ng/mg pri ženskah. V nasprotju s tem je dodatek olj C. rotundus in A. galanga znatno zmanjšal LD50 permetrina na MCM-S z 0,44 na 0,07 (U = 0, Z = -2,309, P = 0,029) oziroma na 0,11 (U = 0, Z) = -2,309, P = 0,029) ng/mg pri ženskah. Na podlagi vrednosti LD50 MCM-S so bile vrednosti SR mešanice EO-permetrin po dodatku olj C. rotundus in A. galanga 6,28 oziroma 4,00. Skladno s tem se je LD50 permetrina proti PMD-R znatno zmanjšal s 3,70 na 0,42 (U = 0, Z = -2,309, P = 0,029) in na 0,003 z dodatkom olj C. rotundus in A. galanga (U = 0). , Z = -2,337, P = 0,029) ng/mg samic. Vrednost SR permetrina v kombinaciji s C. rotundus proti PMD-R je bila 8,81, medtem ko je bila vrednost SR mešanice galangala in permetrina 1233,33. V primerjavi z MCM-S se je vrednost LD50 pozitivne kontrole PBO zmanjšala z 0,44 na 0,26 ng/mg (samice) in s 3,70 ng/mg (samice) na 0,65 ng/mg (U = 0, Z = -2,309, P = 0,029) in PMD-R (U = 0, Z = -2,309, P = 0,029). Vrednosti SR mešanice PBO-permetrin za seva MCM-S in PMD-R sta bili 1,69 oziroma 5,69. Ti rezultati kažejo, da olja C. rotundus in A. galanga ter PBO v večji meri povečajo toksičnost permetrina kot olje C. verum za seva MCM-S in PMD-R.
Aktivnost EO, PBO, permetrina (PE) in njihovih kombinacij v odraslih primerih proti sevom komarjev Aedes, občutljivim na piretroide (MCM-S), in odpornim na piretroide (PMD-R). Aedes aegypti
[45]. Sintetični piretroidi se po vsem svetu uporabljajo za zatiranje skoraj vseh členonožcev kmetijskega in medicinskega pomena. Vendar pa je zaradi škodljivih posledic uporabe sintetičnih insekticidov, zlasti v smislu razvoja in široke odpornosti komarjev, pa tudi vpliva na dolgoročno zdravje in okolje, zdaj nujno treba zmanjšati uporabo tradicionalnih sintetičnih insekticidov in razviti alternative [35, 46, 47]. Poleg varovanja okolja in zdravja ljudi so prednosti botaničnih insekticidov visoka selektivnost, globalna dostopnost ter enostavnost proizvodnje in uporabe, zaradi česar so bolj privlačni za zatiranje komarjev [32, 48, 49]. Ta študija je poleg pojasnjevanja kemijskih lastnosti učinkovitih eteričnih olj z analizo GC-MS ocenila tudi učinkovitost odraslih eteričnih olj in njihovo sposobnost povečanja toksičnosti sintetičnega permetrina aegypti v sevih, občutljivih na piretroide (MCM-S), in odpornih sevih (PMD-R).
Karakterizacija z GC-MS je pokazala, da so bile cipern (14,04 %), β-bisabolen (18,27 %) in cinamaldehid (64,66 %) glavne sestavine olj C. rotundus, A. galanga in C. verum. Te kemikalije so pokazale raznoliko biološko aktivnost. Ahn in sod. [50] so poročali, da 6-acetoksiciperen, izoliran iz korenike C. rotundus, deluje kot protitumorska spojina in lahko povzroči od kaspaze odvisno apoptozo v celicah raka jajčnikov. β-bisabolen, ekstrahiran iz eteričnega olja mire, kaže specifično citotoksičnost proti človeškim in mišjim tumorskim celicam mlečne žleze tako in vitro kot in vivo [51]. Poročali so, da ima cinamaldehid, pridobljen iz naravnih izvlečkov ali sintetiziran v laboratoriju, insekticidno, antibakterijsko, protiglivično, protivnetno, imunomodulatorno, protirakavo in antiangiogeno delovanje [52].
Rezultati biološkega testa od odmerka odvisne aktivnosti pri odraslih so pokazali dober potencial testiranih EO in pokazali, da sta imela seva komarjev Aedes MCM-S in PMD-R podobno občutljivost na EO in PBO. Aedes aegypti. Primerjava učinkovitosti EO in permetrina je pokazala, da ima slednji močnejši alergicidni učinek: vrednosti LD50 so 0,44 in 3,70 ng/mg pri samicah za seva MCM-S in PMD-R. Te ugotovitve podpirajo številne študije, ki kažejo, da so naravni pesticidi, zlasti rastlinski proizvodi, na splošno manj učinkoviti kot sintetične snovi [31, 34, 35, 53, 54]. To je lahko zato, ker je prvi kompleksna kombinacija aktivnih ali neaktivnih sestavin, medtem ko je slednji prečiščena posamezna aktivna spojina. Vendar pa lahko raznolikost in kompleksnost naravnih aktivnih sestavin z različnimi mehanizmi delovanja povečata biološko aktivnost ali ovirata razvoj odpornosti v populacijah gostiteljev [55, 56, 57]. Mnogi raziskovalci so poročali o protikomarnem potencialu C. verum, A. galanga in C. rotundus ter njihovih sestavin, kot so β-bisabolen, cinamaldehid in 1,8-cineol [22, 36, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64]. Vendar pa je pregled literature pokazal, da ni bilo predhodnih poročil o njegovem sinergističnem učinku s permetrinom ali drugimi sintetičnimi insekticidi proti komarjem Aedes. Aedes aegypti.
V tej študiji so bile opažene pomembne razlike v občutljivosti na permetrin med obema sevoma Aedes. Aedes aegypti. MCM-S je občutljiv na permetrin, medtem ko je PMD-R veliko manj občutljiv nanj, s stopnjo odpornosti 8,41. V primerjavi z občutljivostjo MCM-S je PMD-R manj občutljiv na permetrin, vendar bolj občutljiv na EO, kar zagotavlja osnovo za nadaljnje študije, katerih cilj je povečati učinkovitost permetrina z njegovo kombinacijo z EO. Sinergistični biološki test na osnovi kombinacij za učinke na odrasle je pokazal, da binarne mešanice EO in permetrina zmanjšajo ali povečajo smrtnost odraslih Aedes. Aedes aegypti. Dodatek olja C. verum je nekoliko zmanjšal LD50 permetrina proti MCM-S, vendar je nekoliko povečal LD50 proti PMD-R z vrednostmi SR 1,05 oziroma 0,96. To kaže, da olje C. verum nima sinergijskega ali antagonističnega učinka na permetrin pri testiranju na MCM-S in PMD-R. V nasprotju s tem sta olji C. rotundus in A. galanga pokazali pomemben sinergistični učinek, saj sta znatno znižali vrednosti LD50 permetrina na MCM-S ali PMD-R. Ko je bil permetrin kombiniran z EO C. rotundus in A. galanga, sta bili vrednosti SR mešanice EO-permetrin za MCM-S 6,28 oziroma 4,00. Poleg tega so se vrednosti SR znatno povečale, ko je bil permetrin ocenjen v primerjavi s PMD-R v kombinaciji s C. rotundus (SR = 8,81) ali A. galanga (SR = 1233,33). Omeniti velja, da sta tako C. rotundus kot A. galanga znatno povečala toksičnost permetrina proti PMD-R Ae. aegypti. Podobno je bilo ugotovljeno, da PBO poveča toksičnost permetrina z vrednostmi SR 1,69 oziroma 5,69 za seva MCM-S oziroma PMD-R. Ker sta imela C. rotundus in A. galanga najvišje vrednosti SR, sta veljala za najboljša sinergista pri povečanju toksičnosti permetrina na MCM-S oziroma PMD-R.
Več prejšnjih študij je poročalo o sinergističnem učinku kombinacij sintetičnih insekticidov in rastlinskih izvlečkov proti različnim vrstam komarjev. Larvicidni biološki test proti komarju Anopheles Stephensi, ki sta ga preučevala Kalayanasundaram in Das [65], je pokazal, da je bil fention, organofosfat širokega spektra, povezan s Cleodendron inerme, Pedalium murax in Parthenium hysterophorus. Med izvlečki je bila opažena pomembna sinergija s sinergističnim učinkom (SF) 1,31, 1,38, 1,40, 1,48, 1,61 oziroma 2,23. V larvicidnem presejanju 15 vrst mangrov se je izkazalo, da je izvleček petroletra iz korenin mangrov najučinkovitejši proti komarju Culex quinquefasciatus z vrednostjo LC50 25,7 mg/L [66]. Poročali so tudi o sinergističnem učinku tega ekstrakta in botaničnega insekticida piretruma, ki je zmanjšal LC50 piretruma proti ličinkam C. quinquefasciatus z 0,132 mg/L na 0,107 mg/L, poleg tega pa je bil v tej študiji uporabljen izračun SF 1,23. 34,35,44]. Ocenjena je bila kombinirana učinkovitost ekstrakta korenine Solanum citron in več sintetičnih insekticidov (npr. fentiona, cipermetrina (sintetičnega piretroida) in timetfosa (organofosfornega larvicida)) proti komarjem Anopheles. Stephensi [54] in C. quinquefasciatus [34]. Kombinirana uporaba cipermetrina in ekstrakta petrolejskega etra rumenega sadja je pokazala sinergistični učinek na cipermetrin v vseh razmerjih. Najučinkovitejše razmerje je bilo binarno razmerje 1:1 z vrednostmi LC50 in SF 0,0054 ppm oziroma 6,83 glede na An. Stephen West [54]. Medtem ko je bila binarna mešanica S. xanthocarpum in temefosa v razmerju 1:1 antagonistična (SF = 0,6406), je kombinacija S. xanthocarpum-fention (1:1) pokazala sinergistično delovanje proti C. quinquefasciatus s SF 1,3125 [34]]. Tong in Blomquist [35] sta preučevala učinke rastlinskega etilen oksida na toksičnost karbarila (karbamat širokega spektra) in permetrina za komarje Aedes. Aedes aegypti. Rezultati so pokazali, da je etilen oksid iz agarja, črnega popra, brina, smilja, sandalovine in sezama povečal toksičnost karbarila za komarje Aedes. Vrednosti SR za ličinke Aedy se gibljejo od 1,0 do 7,0. Nasprotno pa noben od EO ni bil strupen za odrasle komarje Aedes. Na tej stopnji niso poročali o sinergijskih učinkih kombinacije Aedes aegypti in EO-karbarila. PBO je bil uporabljen kot pozitivna kontrola za povečanje toksičnosti karbarila proti komarjem Aedes. Vrednosti SR ličink in odraslih Aedes aegypti so 4,9–9,5 oziroma 2,3. Na larvicidno aktivnost so bile testirane le binarne mešanice permetrina in EO ali PBO. Mešanica EO-permetrin je imela antagonistični učinek, medtem ko je imela mešanica PBO-permetrin sinergistični učinek proti komarjem Aedes. Ličinke Aedes aegypti. Vendar pa poskusi odziva na odmerek in ocena odziva na odmerek za mešanice PBO-permetrin še niso bili izvedeni. Čeprav je bilo doseženih le malo rezultatov glede sinergijskih učinkov fitosintetskih kombinacij proti vektorjem komarjev, ti podatki podpirajo obstoječe rezultate, ki odpirajo možnost dodajanja sinergistov ne le za zmanjšanje uporabljenega odmerka, temveč tudi za povečanje učinka ubijanja. Učinkovitost žuželk. Poleg tega so rezultati te študije prvič pokazali, da olji C. rotundus in A. galanga sinergistično izkazujeta bistveno večjo učinkovitost proti sevom komarjev Aedes, občutljivim na piretroide, in tistim, ki so odporni na piretroide, v primerjavi s PBO, kadar sta kombinirana s toksičnostjo permetrina. Aedes aegypti. Vendar pa so nepričakovani rezultati sinergistične analize pokazali, da ima olje C. verum največjo aktivnost proti odraslim komarjem proti obema sevoma Aedes. Presenetljivo je bil toksični učinek permetrina na Aedes aegypti nezadovoljiv. Razlike v toksičnih učinkih in sinergističnih učinkih so lahko delno posledica izpostavljenosti različnim vrstam in ravnem bioaktivnih komponent v teh oljih.
Kljub prizadevanjem za razumevanje, kako izboljšati učinkovitost, sinergijski mehanizmi ostajajo nejasni. Možni razlogi za različno učinkovitost in sinergijski potencial lahko vključujejo razlike v kemični sestavi testiranih izdelkov in razlike v občutljivosti komarjev, povezane s statusom odpornosti in razvojem. Med glavnimi in stranskimi komponentami etilen oksida, testiranimi v tej študiji, obstajajo razlike, nekatere od teh spojin pa so pokazale, da imajo repelentne in toksične učinke proti različnim škodljivcem in prenašalcem bolezni [61, 62, 64, 67, 68]. Vendar pa glavne spojine, značilne za olja C. rotundus, A. galanga in C. verum, kot so cipern, β-bisabolen in cinamaldehid, v tem članku niso bile testirane glede njihovega delovanja proti odraslim komarjem oziroma sinergijskega delovanja proti Ae. Aedes aegypti. Zato so potrebne nadaljnje študije za izolacijo aktivnih sestavin, prisotnih v vsakem eteričnem olju, in pojasnitev njihove insekticidne učinkovitosti in sinergijskih interakcij proti temu prenašalcu komarjev. Na splošno je insekticidno delovanje odvisno od delovanja in reakcije med strupi in tkivi žuželk, kar lahko poenostavimo in razdelimo na tri faze: prodiranje v kožo telesa žuželke in membrane ciljnih organov, aktivacija (= interakcija s tarčo) in razstrupljanje strupenih snovi [57, 69]. Zato sinergizem insekticidov, ki povzroči povečano učinkovitost kombinacij strupenih snovi, zahteva vsaj eno od teh kategorij, kot so povečana penetracija, večja aktivacija akumuliranih spojin ali manj zmanjšana razstrupljanje aktivne sestavine pesticida. Na primer, energijska toleranca upočasni prodiranje kutikule skozi odebeljeno kutikulo in biokemična odpornost, kot je okrepljen metabolizem insekticida, opažen pri nekaterih odpornih sevih žuželk [70, 71]. Pomembna učinkovitost encimov pri povečanju toksičnosti permetrina, zlasti proti PMD-R, lahko kaže na rešitev problema odpornosti na insekticide z interakcijo z mehanizmi odpornosti [57, 69, 70, 71]. Tong in Blomquist [35] sta rezultate te študije podprla z dokazovanjem sinergistične interakcije med encimi in sintetičnimi pesticidi. aegypti obstajajo dokazi o zaviralni aktivnosti proti razstrupljevalnim encimom, vključno s citokrom P450 monooksigenazami in karboksilesterazami, ki so tesno povezane z razvojem odpornosti na tradicionalne pesticide. PBO naj bi bil ne le presnovni zaviralec citokrom P450 monooksigenaze, ampak tudi izboljša penetracijo insekticidov, kar dokazuje njegova uporaba kot pozitivne kontrole v sinergističnih študijah [35, 72]. Zanimivo je, da je 1,8-cineol, ena od pomembnih sestavin galangalovega olja, znan po svojih toksičnih učinkih na vrste žuželk [22, 63, 73] in da ima sinergistične učinke na več področjih raziskav biološke aktivnosti [74]. ,75,76,77]. Poleg tega ima 1,8-cineol v kombinaciji z različnimi zdravili, vključno s kurkuminom [78], 5-fluorouracilom [79], mefenaminsko kislino [80] in zidovudinom [81], tudi učinek spodbujanja permeacije in vitro. Možna vloga 1,8-cineola v sinergističnem insekticidnem delovanju torej ni le kot aktivna sestavina, temveč tudi kot ojačevalec penetracije. Zaradi večjega sinergizma s permetrinom, zlasti proti PMD-R, so lahko sinergistični učinki galangalovega olja in olja trihozantesa, opaženi v tej študiji, posledica interakcij z mehanizmi odpornosti, tj. povečane prepustnosti za klor. Piretroidi povečajo aktivacijo nakopičenih spojin in zavirajo razstrupljevalne encime, kot so citokrom P450 monooksigenaze in karboksilesteraze. Vendar pa ti vidiki zahtevajo nadaljnje študije, da bi razjasnili specifično vlogo EO in njegovih izoliranih spojin (samih ali v kombinaciji) v sinergističnih mehanizmih.
Leta 1977 so poročali o naraščajočih ravneh odpornosti na permetrin v večjih populacijah prenašalcev na Tajskem, v naslednjih desetletjih pa so uporabo permetrina v veliki meri nadomestile druge piretroidne kemikalije, zlasti tiste, ki jih je nadomestil deltametrin [82]. Vendar pa je odpornost prenašalcev na deltametrin in druge razrede insekticidov izjemno pogosta po vsej državi zaradi prekomerne in vztrajne uporabe [14, 17, 83, 84, 85, 86]. Za boj proti tej težavi je priporočljivo rotirati ali ponovno uporabiti zavržene pesticide, ki so bili prej učinkoviti in manj strupeni za sesalce, kot je permetrin. Čeprav se je uporaba permetrina v nedavnih nacionalnih vladnih programih za zatiranje komarjev zmanjšala, je odpornost na permetrin še vedno mogoče najti v populacijah komarjev. To je lahko posledica izpostavljenosti komarjev komercialnim gospodinjskim izdelkom za zatiranje škodljivcev, ki so v glavnem sestavljeni iz permetrina in drugih piretroidov [14, 17]. Zato uspešna ponovna uporaba permetrina zahteva razvoj in izvajanje strategij za zmanjšanje odpornosti prenašalcev. Čeprav nobeno od eteričnih olj, testiranih posamično v tej študiji, ni bilo tako učinkovito kot permetrin, je skupno delovanje s permetrinom povzročilo impresivne sinergistične učinke. To je obetaven znak, da interakcija EO z mehanizmi odpornosti povzroči, da je kombinacija permetrina z EO učinkovitejša od insekticida ali EO samega, zlasti proti PMD-R Ae. Aedes aegypti. Prednosti sinergističnih mešanic pri povečanju učinkovitosti, kljub uporabi nižjih odmerkov za zatiranje vektorjev, lahko vodijo do boljšega obvladovanja odpornosti in zmanjšanja stroškov [33, 87]. Iz teh rezultatov je razveseljivo ugotoviti, da so bila EO A. galanga in C. rotundus bistveno učinkovitejša od PBO pri sinergističnem delovanju toksičnosti permetrina tako pri sevih MCM-S kot PMD-R in so potencialna alternativa tradicionalnim ergogenim pripomočkom.
Izbrani EO so imeli pomembne sinergistične učinke pri povečanju toksičnosti za odrasle proti PMD-R Ae. aegypti, zlasti galangalovo olje, ki ima vrednost SR do 1233,33, kar kaže na to, da ima EO širok potencial kot sinergist pri povečanju učinkovitosti permetrina. To lahko spodbudi uporabo novega aktivnega naravnega proizvoda, kar bi skupaj lahko povečalo uporabo zelo učinkovitih izdelkov za zatiranje komarjev. Prav tako razkriva potencial etilen oksida kot alternativnega sinergista za učinkovito izboljšanje starejših ali tradicionalnih insekticidov za reševanje obstoječih težav z odpornostjo v populacijah komarjev. Uporaba lahko dostopnih rastlin v programih zatiranja komarjev ne le zmanjšuje odvisnost od uvoženih in dragih materialov, temveč tudi spodbuja lokalna prizadevanja za krepitev sistemov javnega zdravja.
Ti rezultati jasno kažejo na pomemben sinergistični učinek, ki ga povzroča kombinacija etilen oksida in permetrina. Rezultati poudarjajo potencial etilen oksida kot rastlinskega sinergista pri zatiranju komarjev, saj povečuje učinkovitost permetrina proti komarjem, zlasti v odpornih populacijah. Nadaljnji razvoj in raziskave bodo zahtevale sinergijsko bioanalizo olj galangala in alpinije ter njihovih izoliranih spojin, kombinacije insekticidov naravnega ali sintetičnega izvora proti več vrstam in stadijem komarjev ter testiranje toksičnosti proti neciljnim organizmom. Praktična uporaba etilen oksida kot ustreznega alternativnega sinergista.
Svetovna zdravstvena organizacija. Globalna strategija za preprečevanje in obvladovanje denge 2012–2020. Ženeva: Svetovna zdravstvena organizacija, 2012.
Weaver SC, Costa F., Garcia-Blanco MA, Ko AI, Ribeiro GS, Saade G., et al. Zika virus: zgodovina, pojav, biologija in možnosti nadzora. Protivirusne raziskave. 2016; 130: 69–80.
Svetovna zdravstvena organizacija. Informativni list o dengi. 2016. http://www.searo.who.int/entity/vector_borne_tropical_diseases/data/data_factsheet/en/. Datum dostopa: 20. januar 2017
Ministrstvo za javno zdravje. Trenutno stanje primerov denge in hemoragične denge na Tajskem. 2016. http://www.m-society.go.th/article_attach/13996/17856.pdf. Datum dostopa: 6. januar 2017
Ooi EE, Goh CT, Gabler DJ. 35 let preprečevanja denge in nadzora vektorjev v Singapurju. Nenadna nalezljiva bolezen. 2006;12:887–93.
Morrison AC, Zielinski-Gutierrez E, Scott TW, Rosenberg R. Prepoznavanje izzivov in predlaganje rešitev za nadzor virusnih vektorjev Aedes aegypti. PLOS Medicine. 2008;5:362–6.
Centri za nadzor in preprečevanje bolezni. Dengue mrzlica, entomologija in ekologija. 2016. http://www.cdc.gov/dengue/entomologyecology/. Datum dostopa: 6. januar 2017
Ohimain EI, Angaye TKN, Bassey SE Primerjava larvicidne aktivnosti listov, lubja, stebel in korenin Jatropa curcas (Euphorbiaceae) proti prenašalcu malarije Anopheles gambiae. SZhBR. 2014;3:29-32.
Soleimani-Ahmadi M, Watandoust H, Zareh M. Značilnosti habitata ličink vrste Anopheles na območjih z malarijo v okviru programa za izkoreninjenje malarije v jugovzhodnem Iranu. Asia Pacific J Trop Biomed. 2014;4(Suppl 1):S73–80.
Bellini R, Zeller H, Van Bortel W. Pregled pristopov k nadzoru vektorjev, preprečevanju in obvladovanju izbruhov virusa Zahodnega Nila ter izzivi, s katerimi se sooča Evropa. Paraziti vektorji. 2014;7:323.
Muthusamy R., Shivakumar MS Selekcija in molekularni mehanizmi odpornosti na cipermetrin pri rdečih gosenicah (Amsacta albistriga Walker). Biokemijska fiziologija škodljivcev. 2014;117:54–61.
Ramkumar G., Shivakumar MS Laboratorijska študija odpornosti na permetrin in navzkrižne odpornosti vrste Culex quinquefasciatus na druge insekticide. Raziskovalni center Palastor. 2015;114:2553–60.
Matsunaka S, Hutson DH, Murphy SD. Kemija pesticidov: Človeška blaginja in okolje, letnik 3: Mehanizem delovanja, metabolizem in toksikologija. New York: Pergamon Press, 1983.
Chareonviriyaphap T, Bangs MJ, Souvonkert V, Kongmi M, Korbel AV, Ngoen-Klan R. Pregled odpornosti na insekticide in vedenjskega izogibanja prenašalcev človeških bolezni na Tajskem. Paraziti, vektorji. 2013;6:280.
Chareonviriyaphap T, Aum-Aung B, Ratanatham S. Trenutni vzorci odpornosti na insekticide med prenašalci komarjev na Tajskem. Southeast Asia J Trop Med Public Health. 1999;30:184-94.
Chareonviriyaphap T, Bangs MJ, Ratanatham S. Stanje malarije na Tajskem. Southeast Asia J Trop Med Public Health. 2000;31:225–37.
Plernsub S, Saingamsuk J, Yanola J, Lumjuan N, Thippavankosol P, Walton S, Somboon P. Časovna pogostost mutacij odpornosti proti udarcu F1534C in V1016G pri komarjih Aedes aegypti v Chiang Maiju na Tajskem in vpliv mutacij na učinkovitost termičnih meglenih pršil, ki vsebujejo piretroide. Aktatrop. 2016;162:125–32.
Vontas J, Kioulos E, Pavlidi N, Moru E, Della Torre A, Ranson H. Odpornost na insekticide v glavnih prenašalcih mrzlice mrzlice Aedes albopictus in Aedes aegypti. Biokemijska fiziologija škodljivcev. 2012; 104: 126–31.
Čas objave: 8. julij 2024