proteiniALL so ohranjeni glavniregulatorji rastiki igrajo osrednjo vlogo pri nadzoru razvoja rastlin kot odziv na notranje in okoljske signale. deluje kot transkripcijski regulator in se rekrutira za ciljne promotorje z vezavo na transkripcijske faktorje (TF) in histon H2A prek svoje domene GRAS. Nedavne študije so pokazale, da je stabilnost po translaciji regulirana z dvema mehanizmoma: poliubikvitinacijo, ki jo inducira fitohormon giberelin, kar vodi do njegove hitre razgradnje, in konjugacijo majhnih ubikvitinu podobnih modifikatorjev (SUMO), ki povečajo njegovo kopičenje. Poleg tega aktivnost dinamično regulirata dve različni glikozilaciji: interakcijo-TF okrepi O-fukozilacija, vendar jo zavira O-vezana modifikacija N-acetilglukozamina (O-GlcNAc). Vendar pa vloga fosforilacije ostaja nejasna, saj so prejšnje študije pokazale nasprotujoče si rezultate, od tistih, ki kažejo, da fosforilacija spodbuja ali zmanjšuje razgradnjo do drugih, ki kažejo, da fosforilacija ne vpliva na njeno stabilnost. Tukaj identificiramo mesta fosforilacije vga1-3(RGA, AtDELLA), prečiščene iz Arabidopsis thaliana z analizo masne spektrometrije, kažejo, da fosforilacija dveh RGA peptidov na območjih PolyS in PolyS/T spodbuja vezavo H2A in poveča aktivnost RGA. Povezava RGA s ciljnimi promotorji. Fosforilacija ne vpliva na interakcije RGA-TF ali stabilnost RGA. Naša študija razkriva molekularni mehanizem, s katerim fosforilacija inducira aktivnost DJAL.
Za razjasnitev vloge fosforilacije pri uravnavanju delovanja Aleksandrije je ključnega pomena identificirati mesta fosforilacije Aleksandrije in vivo in izvesti funkcionalne analize v rastlinah. Z afinitetnim čiščenjem rastlinskih ekstraktov, ki mu je sledila analiza MS/MS, smo v RGA identificirali več fosfozitov. V pogojih pomanjkanja GA se fosforilacija RHA poveča, vendar fosforilacija ne vpliva na njeno stabilnost. Pomembno je, da sta testa co-IP in ChIP-qPCR pokazala, da fosforilacija na območju PolyS/T RGA spodbuja njegovo interakcijo s H2A in njegovo povezavo s ciljnimi promotorji, kar razkriva mehanizem, s katerim fosforilacija inducira delovanje RGA.
RGA se rekrutira za ciljni kromatin preko interakcije poddomene LHR1 s TF in se nato veže na H2A preko svoje regije PolyS/T in poddomene PFYRE, s čimer tvori kompleks H2A-RGA-TF za stabilizacijo RGA. Fosforilacija Pep 2 v regiji PolyS/T med domeno DNA in domeno GRAS z neidentificirano kinazo poveča vezavo RGA-H2A. Mutantni protein rgam2A odpravi fosforilacijo RGA in sprejme drugačno konformacijo proteina, da bi motil vezavo H2A. To povzroči destabilizacijo prehodnih interakcij TF-rgam2A in disociacijo rgam2A od ciljnega kromatina. Ta slika prikazuje samo transkripcijsko represijo, ki jo posreduje RGA. Podoben vzorec bi lahko opisal za transkripcijsko aktivacijo, ki jo posreduje RGA, le da bi kompleks H2A-RGA-TF spodbujal transkripcijo ciljnega gena, defosforilacija rgam2A pa bi zmanjšala transkripcijo. Slika je spremenjena po Huang et al.21.
Vsi kvantitativni podatki so bili statistično analizirani z uporabo programa Excel, pomembne razlike pa so bile določene s Studentovim t-testom. Za predhodno določitev velikosti vzorca niso bile uporabljene nobene statistične metode. Iz analize niso bili izključeni nobeni podatki; poskus ni bil randomiziran; raziskovalci niso bili slepi glede porazdelitve podatkov med poskusom in vrednotenjem rezultatov. Velikost vzorca je navedena v legendi slike in izvorni datoteki.
Za več informacij o zasnovi študije glejte povzetek poročila o naravnem portfelju, ki je povezan s tem člankom.
Podatki proteomike z masno spektrometrijo so bili prispevani konzorciju ProteomeXchange prek partnerskega repozitorija PRIDE66 z identifikatorjem nabora podatkov PXD046004. Vsi drugi podatki, pridobljeni med to študijo, so predstavljeni v dodatnih informacijah, dodatnih podatkovnih datotekah in datotekah s surovimi podatki. Izvorni podatki so navedeni za ta članek.
Čas objave: 8. november 2024