Razširjena uporaba sintetičnih pesticidov je povzročila številne težave, vključno s pojavom odpornih organizmov, degradacijo okolja in škodo za zdravje ljudi.Zato so nujno potrebni novi mikrobiološki pesticidi, ki so varni za zdravje ljudi in okolje.V tej študiji je bil ramnolipidni biosurfaktant, ki ga proizvaja Enterobacter cloacae SJ2, uporabljen za oceno toksičnosti za ličinke komarjev (Culex quinquefasciatus) in termitov (Odontotermes obesus).Rezultati so pokazali, da je stopnja umrljivosti med zdravljenji odvisna od odmerka.Vrednost LC50 (50-odstotna smrtna koncentracija) po 48 urah za biosurfaktante termitov in ličink komarjev je bila določena z metodo prilagajanja krivulje nelinearne regresije.Rezultati so pokazali, da so bile 48-urne vrednosti LC50 (95-odstotni interval zaupanja) larvicidne in antitermitne aktivnosti biosurfaktanta 26,49 mg/L (razpon od 25,40 do 27,57) oziroma 33,43 mg/L (razpon od 31,09 do 35,68).Glede na histopatološko preiskavo je zdravljenje z biosurfaktantom povzročilo hude poškodbe tkiv organelov ličink in termitov.Rezultati te študije kažejo, da je mikrobni biosurfaktant, ki ga proizvaja Enterobacter cloacae SJ2, odlično in potencialno učinkovito orodje za nadzor Cx.quinquefasciatus in O. obesus.
Tropske države se soočajo z velikim številom bolezni, ki jih prenašajo komarji1.Pomen bolezni, ki jih prenašajo komarji, je zelo razširjen.Več kot 400.000 ljudi vsako leto umre zaradi malarije, nekatera večja mesta pa se soočajo z epidemijami hudih bolezni, kot so denga, rumena mrzlica, čikungunja in zika.2 Bolezni, ki jih prenašajo vektorji, so povezane z eno od šestih okužb po vsem svetu, pri čemer jih največ povzročijo komarji. pomembni primeri3 ,4.Culex, Anopheles in Aedes so trije rodovi komarjev, ki so najpogosteje povezani s prenosom bolezni5.Razširjenost mrzlice denga, okužbe, ki jo prenaša komar Aedes aegypti, se je v zadnjem desetletju povečala in predstavlja veliko grožnjo javnemu zdravju4,7,8.Po podatkih Svetovne zdravstvene organizacije (WHO) več kot 40 % svetovnega prebivalstva grozi z mrzlico denga, pri čemer se letno pojavi 50–100 milijonov novih primerov v več kot 100 državah9,10,11.Mrzlica denga je postala velik javnozdravstveni problem, saj se je pojavnost po vsem svetu povečala12,13,14.Anopheles gambiae, splošno znan kot afriški komar Anopheles, je najpomembnejši prenašalec človeške malarije v tropskih in subtropskih regijah15.Virus zahodnega Nila, encefalitis St. Louisa, japonski encefalitis in virusne okužbe konj in ptic prenašajo komarji Culex, ki jih pogosto imenujemo tudi hišni komarji.Poleg tega so tudi prenašalci bakterijskih in parazitskih bolezni16.Na svetu je več kot 3000 vrst termitov, ki obstajajo že več kot 150 milijonov let17.Večina škodljivcev živi v tleh in se prehranjuje z lesom in lesnimi izdelki, ki vsebujejo celulozo.Indijski termit Odontotermes obesus je pomemben škodljivec, ki povzroča resno škodo na pomembnih pridelkih in drevesih nasadov18.Na kmetijskih območjih lahko napadi termitov v različnih fazah povzročijo ogromno gospodarsko škodo na različnih pridelkih, drevesnih vrstah in gradbenih materialih.Termiti lahko povzročijo tudi zdravstvene težave19.
Vprašanje odpornosti mikroorganizmov in škodljivcev na današnjem farmacevtskem in kmetijskem področju je kompleksno20,21.Zato bi morali obe podjetji iskati nova stroškovno učinkovita protimikrobna sredstva in varne biopesticide.Zdaj so na voljo sintetični pesticidi, ki so se izkazali za nalezljive in odganjajo neciljne koristne žuželke22.V zadnjih letih so se raziskave biosurfaktantov razširile zaradi njihove uporabe v različnih industrijah.Biosurfaktanti so zelo uporabni in bistveni v kmetijstvu, sanaciji tal, pridobivanju nafte, odstranjevanju bakterij in žuželk ter predelavi hrane23,24.Biosurfaktanti ali mikrobne površinsko aktivne snovi so biološke površinsko aktivne kemikalije, ki jih proizvajajo mikroorganizmi, kot so bakterije, kvasovke in glive, v obalnih habitatih in območjih, onesnaženih z nafto 25,26.Kemično pridobljene površinsko aktivne snovi in biosurfaktanti sta dve vrsti, pridobljeni neposredno iz naravnega okolja27.Različne biosurfaktante pridobivajo iz morskih habitatov28,29.Zato znanstveniki iščejo nove tehnologije za proizvodnjo biosurfaktantov na osnovi naravnih bakterij30,31.Napredek v tovrstnih raziskavah dokazuje pomen teh bioloških spojin za varstvo okolja32.Bacillus, Pseudomonas, Rhodococcus, Alcaligenes, Corynebacterium in ti bakterijski rodovi so dobro raziskani predstavniki23,33.
Obstaja veliko vrst biosurfaktantov s širokim spektrom uporabe34.Bistvena prednost teh spojin je, da imajo nekatere od njih antibakterijsko, larvicidno in insekticidno delovanje.To pomeni, da se lahko uporabljajo v kmetijski, kemični, farmacevtski in kozmetični industriji35,36,37,38.Ker so biosurfaktanti na splošno biorazgradljivi in okolju prijazni, se uporabljajo v integriranih programih zatiranja škodljivcev za zaščito pridelkov39.Tako je bilo pridobljeno osnovno znanje o larvicidnem in antitermitnem delovanju mikrobnih biosurfaktantov, ki jih proizvaja Enterobacter cloacae SJ2.Preučili smo umrljivost in histološke spremembe pri izpostavljenosti različnim koncentracijam ramnolipidnih biosurfaktantov.Poleg tega smo ovrednotili široko uporabljen računalniški program Quantitative Structure-Activity (QSAR) Ecological Structure-Activity (ECOSAR) za določanje akutne toksičnosti za mikroalge, vodno bolho in ribe.
V tej študiji je bila antitermitna aktivnost (toksičnost) prečiščenih biosurfaktantov pri različnih koncentracijah v razponu od 30 do 50 mg/ml (v intervalih po 5 mg/ml) testirana proti indijskim termitom, O. obesus in četrti vrsti )Evaluate.Ličinke instar Cx.Ličinke komarjev quinquefasciatus.Koncentracije biosurfaktanta LC50 v 48 urah proti O. obesus in Cx.C. solanacearum.Ličinke komarjev so bile identificirane z metodo prilagajanja krivulje nelinearne regresije.Rezultati so pokazali, da se smrtnost termitov povečuje z naraščajočo koncentracijo biosurfaktanta.Rezultati so pokazali, da ima biosurfaktant larvicidno aktivnost (slika 1) in antitermitsko aktivnost (slika 2), z 48-urnimi vrednostmi LC50 (95 % IZ) 26,49 mg/L (25,40 do 27,57 ) in 33,43 mg/l. l (sl. 31.09 do 35.68) oziroma (tabela 1).Glede na akutno toksičnost (48 ur) je biosurfaktant razvrščen kot "škodljiv" za testirane organizme.Biosurfaktant, proizveden v tej študiji, je pokazal odlično larvicidno aktivnost s 100-odstotno smrtnostjo v 24-48 urah po izpostavljenosti.
Izračunajte vrednost LC50 za larvicidno aktivnost.Ujemanje nelinearne regresijske krivulje (polna črta) in 95-odstotni interval zaupanja (zasenčeno območje) za relativno umrljivost (%).
Izračunajte vrednost LC50 za aktivnost proti termitom.Ujemanje nelinearne regresijske krivulje (polna črta) in 95-odstotni interval zaupanja (zasenčeno območje) za relativno umrljivost (%).
Na koncu poskusa smo pod mikroskopom opazili morfološke spremembe in nepravilnosti.Morfološke spremembe so opazili pri kontrolni in tretirani skupini pri 40-kratni povečavi.Kot je prikazano na sliki 3, se je pri večini ličink, zdravljenih z biološkimi površinsko aktivnimi snovmi, pojavila motnja v rasti.Slika 3a prikazuje normalno Cx.quinquefasciatus, slika 3b prikazuje anomalen Cx.Povzroča pet ličink ogorčic.
Vpliv subletalnih (LC50) odmerkov biosurfaktantov na razvoj ličink Culex quinquefasciatus.Slika s svetlobnim mikroskopom (a) normalnega Cx pri 40-kratni povečavi.quinquefasciatus (b) Nenormalen Cx.Povzroča pet ličink ogorčic.
V tej študiji je histološki pregled zdravljenih ličink (slika 4) in termitov (slika 5) razkril več nepravilnosti, vključno z zmanjšanjem trebušne površine in poškodbami mišic, epitelijskih plasti in kože.srednje črevo.Histologija je razkrila mehanizem zaviralne aktivnosti biosurfaktanta, uporabljenega v tej študiji.
Histopatologija normalnih nezdravljenih ličink Cx 4. stopnje.ličinke quinquefasciatus (kontrola: (a,b)) in obdelane z biosurfaktantom (obdelava: (c,d)).Puščice označujejo zdravljeni črevesni epitelij (epi), jedra (n) in mišice (mu).Prečnik = 50 µm.
Histopatologija normalne nezdravljene O. obesus (kontrola: (a,b)) in obdelane z biosurfaktantom (zdravljenje: (c,d)).Puščice označujejo črevesni epitelij (epi) oziroma mišice (mu).Prečnik = 50 µm.
V tej študiji je bil ECOSAR uporabljen za napovedovanje akutne toksičnosti ramnolipidnih biosurfaktantov za primarne proizvajalce (zelene alge), primarne potrošnike (vodne bolhe) in sekundarne potrošnike (ribe).Ta program uporablja sofisticirane kvantitativne modele spojine struktura-aktivnost za oceno toksičnosti na podlagi molekularne strukture.Model uporablja programsko opremo struktura-aktivnost (SAR) za izračun akutne in dolgotrajne strupenosti snovi za vodne vrste.Natančneje, tabela 2 povzema ocenjene srednje letalne koncentracije (LC50) in srednje efektivne koncentracije (EC50) za več vrst.Domnevna toksičnost je bila razvrščena v štiri stopnje z uporabo globalno usklajenega sistema za razvrščanje in označevanje kemikalij (tabela 3).
Zatiranje vektorskih bolezni, zlasti sevov komarjev in komarjev Aedes.Egipčani, zdaj težko delo 40,41,42,43,44,45,46.Čeprav so nekateri kemično razpoložljivi pesticidi, kot so piretroidi in organofosfati, nekoliko koristni, predstavljajo veliko tveganje za zdravje ljudi, vključno s sladkorno boleznijo, reproduktivnimi motnjami, nevrološkimi motnjami, rakom in boleznimi dihal.Poleg tega lahko sčasoma te žuželke postanejo odporne proti njim13,43,48.Tako bodo učinkoviti in okolju prijazni biološki ukrepi zatiranja postali bolj priljubljena metoda zatiranja komarjev49,50.Benelli51 je predlagal, da bi bilo zgodnje zatiranje vektorjev komarjev učinkovitejše v mestnih območjih, vendar niso priporočali uporabe larvicidov na podeželju52.Tom in drugi 53 so prav tako predlagali, da bi bilo zatiranje komarjev v njihovi nezreli fazi varna in preprosta strategija, ker so bolj občutljivi na sredstva za zatiranje 54 .
Proizvodnja biosurfaktanta z močnim sevom (Enterobacter cloacae SJ2) je pokazala dosledno in obetavno učinkovitost.Naša prejšnja študija je poročala, da Enterobacter cloacae SJ2 optimizira proizvodnjo biosurfaktanta z uporabo fizikalno-kemijskih parametrov26.V skladu z njihovo študijo so bili optimalni pogoji za proizvodnjo biosurfaktanta s potencialnim izolatom E. cloacae inkubacija 36 ur, mešanje pri 150 obratih na minuto, pH 7,5, 37 °C, slanost 1 ppt, 2 % glukoze kot vira ogljika, 1 % kvasovk. .ekstrakt smo uporabili kot vir dušika, da smo dobili 2,61 g/L biosurfaktanta.Poleg tega so biosurfaktante karakterizirali s TLC, FTIR in MALDI-TOF-MS.To je potrdilo, da je ramnolipid biosurfaktant.Glikolipidni biosurfaktanti so najbolj intenzivno raziskan razred drugih vrst biosurfaktantov55.Sestavljeni so iz ogljikohidratnih in lipidnih delov, predvsem verig maščobnih kislin.Med glikolipidi sta glavna predstavnika ramnolipid in soforolipid56.Ramnolipidi vsebujejo dva dela ramnoze, povezana z mono- ali di-β-hidroksidekanojsko kislino 57 .Uporaba ramnolipidov v medicinski in farmacevtski industriji je dobro uveljavljena 58, poleg njihove nedavne uporabe kot pesticidov 59.
Interakcija biosurfaktanta s hidrofobno regijo dihalnega sifona omogoča, da voda prehaja skozi stomatalno votlino, s čimer se poveča stik ličink z vodnim okoljem.Prisotnost biosurfaktantov vpliva tudi na sapnik, katerega dolžina je blizu površine, zaradi česar ličinke lažje prilezejo na površino in dihajo.Posledično se površinska napetost vode zmanjša.Ker se ličinke ne morejo pritrditi na površino vode, padejo na dno rezervoarja, kar poruši hidrostatični tlak, kar povzroči prekomerno porabo energije in smrt zaradi utopitve38,60.Podobne rezultate je dobil Ghribi61, kjer je biosurfaktant, ki ga proizvaja Bacillus subtilis, pokazal larvicidno aktivnost proti Ephestia kuehniella.Podobno je larvicidna aktivnost Cx.Das in Mukherjee23 sta ocenila tudi učinek cikličnih lipopeptidov na ličinke quinquefasciatusa.
Rezultati te študije zadevajo larvicidno aktivnost ramnolipidnih biosurfaktantov proti Cx.Ubijanje komarjev quinquefasciatus je skladno s predhodno objavljenimi rezultati.Uporabljajo se na primer biosurfaktanti na osnovi surfaktina, ki jih proizvajajo različne bakterije iz rodu Bacillus.in Pseudomonas spp.Nekatera zgodnja poročila64,65,66 so poročala o aktivnosti lipopeptidnih biosurfaktantov iz Bacillus subtilis23, ki ubijajo ličinke.Deepali et al.63 so ugotovili, da ima ramnolipidni biosurfaktant, izoliran iz Stenotropomonas maltophilia, močno larvicidno aktivnost pri koncentraciji 10 mg/L.Silva idr.67 so poročali o larvicidnem delovanju ramnolipidnega biosurfaktanta proti Ae pri koncentraciji 1 g/L.Aedes aegypti.Kanakdande et al.68 so poročali, da so lipopeptidne biosurfaktante, ki jih proizvaja Bacillus subtilis, povzročile splošno umrljivost pri ličinkah Culex in termitih z lipofilno frakcijo evkaliptusa.Podobno Masendra et al.69 je poročalo o smrtnosti mravelj delavk (Cryptotermes cynocephalus Light.) 61,7 % v lipofilnih n-heksanskih in EtOAc frakcijah surovega ekstrakta E.
Parthipan in drugi 70 so poročali o insekticidni uporabi lipopeptidnih biosurfaktantov, ki jih proizvajata Bacillus subtilis A1 in Pseudomonas stutzeri NA3, proti Anopheles Stephensi, vektorju parazita malarije Plasmodium.Opazili so, da so ličinke in mladiči preživeli dlje, imeli krajša obdobja ovipozicije, bili sterilni in imeli krajšo življenjsko dobo, če so bili obdelani z različnimi koncentracijami biosurfaktantov.Opažene vrednosti LC50 biosurfaktanta A1 B. subtilis so bile 3,58, 4,92, 5,37, 7,10 in 7,99 mg/L za različna stanja ličink (tj. ličinke I, II, III, IV in lutke v stadiju).Za primerjavo so bile biosurfaktanti za stadije ličinke I-IV in stadije pupala Pseudomonas stutzeri NA3 2,61, 3,68, 4,48, 5,55 oziroma 6,99 mg/L.Zakasnjena fenologija preživelih ličink in mladičev naj bi bila posledica znatnih fizioloških in presnovnih motenj, ki jih povzroči zdravljenje z insekticidi71.
Sev Wickerhamomyces anomalus CCMA 0358 proizvaja biosurfaktant s 100-odstotnim larvicidnim delovanjem proti komarjem Aedes.aegypti 24-urni interval 38 je bil višji, kot so poročali Silva et al.Dokazano je, da biosurfaktant, proizveden iz Pseudomonas aeruginosa z uporabo sončničnega olja kot vira ogljika, ubije 100 % ličink v 48 urah 67 .Abinaya et al.72 in Pradhan et al.73 sta tudi dokazala larvicidne ali insekticidne učinke površinsko aktivnih snovi, ki jih proizvaja več izolatov iz rodu Bacillus.Prej objavljena študija Senthil-Nathan et al.ugotovili, da bo verjetno umrlo 100 % ličink komarjev, izpostavljenih rastlinskim lagunam.74.
Ocenjevanje subletalnih učinkov insekticidov na biologijo žuželk je ključnega pomena za integrirane programe zatiranja škodljivcev, ker subletalni odmerki/koncentracije žuželk ne ubijejo, lahko pa zmanjšajo populacije žuželk v prihodnjih generacijah z motnjami bioloških značilnosti10.Siqueira et al 75 so opazili popolno larvicidno aktivnost (100-odstotna smrtnost) ramnolipidnega biosurfaktanta (300 mg/ml) pri testiranju pri različnih koncentracijah v razponu od 50 do 300 mg/ml.Stadij ličinke sevov Aedes aegypti.Analizirali so učinke časa do smrti in subletalne koncentracije na preživetje ličink in plavalno aktivnost.Poleg tega so opazili zmanjšanje hitrosti plavanja po 24–48 urah izpostavljenosti subletalnim koncentracijam biosurfaktanta (npr. 50 mg/mL in 100 mg/mL).Za strupe, ki imajo obetajoče subletalne vloge, se domneva, da so bolj učinkoviti pri povzročanju večkratne škode izpostavljenim škodljivcem76.
Histološka opazovanja naših rezultatov kažejo, da biosurfaktanti, ki jih proizvaja Enterobacter cloacae SJ2, bistveno spremenijo tkiva ličink komarjev (Cx. quinquefasciatus) in termitov (O. obesus).Podobne anomalije so povzročili pripravki iz bazilikinega olja v An.gambiaes.s in An.arabico je opisal Ochola77.Kamaraj et al.78 so prav tako opisali iste morfološke nepravilnosti pri An.Stephaniejine ličinke so bile izpostavljene nanodelcem zlata.Vasantha-Srinivasan et al.79 so prav tako poročali, da je eterično olje pastirske torbice močno poškodovalo komoro in epitelijske plasti Aedes albopictus.Aedes aegypti.Raghavendran et al so poročali, da so ličinke komarjev zdravili s 500 mg/ml izvlečka micelija lokalne glive Penicillium.Ae kažejo hudo histološko poškodbo.aegypti in Cx.Stopnja umrljivosti 80. Pred tem sta Abinaya et al.Proučevali so ličinke četrte stopnje An.Stephensi in Ae.aegypti odkril številne histološke spremembe pri Aedes aegypti, zdravljenih z eksopolisaharidi B. licheniformis, vključno s cekumom želodca, atrofijo mišic, poškodbo in dezorganizacijo ganglijev živčnih vrvic72.Po mnenju Raghavendran et al. so po zdravljenju z izvlečkom micelija P. daleae celice srednjega črevesa testiranih komarjev (ličinke 4. stopnje) pokazale otekanje črevesnega lumna, zmanjšanje medcelične vsebine in degeneracijo jedra81.Enake histološke spremembe so opazili pri ličinkah komarjev, zdravljenih z izvlečkom listov ehinaceje, kar kaže na insekticidni potencial tretiranih spojin50.
Uporaba programske opreme ECOSAR je prejela mednarodno priznanje82.Sedanje raziskave kažejo, da akutna toksičnost biosurfaktantov ECOSAR za mikroalge (C. vulgaris), ribe in vodne bolhe (D. magna) spada v kategorijo "strupenosti", ki so jo opredelili Združeni narodi83.Model ekotoksičnosti ECOSAR uporablja SAR in QSAR za napovedovanje akutne in dolgoročne toksičnosti snovi in se pogosto uporablja za napovedovanje toksičnosti organskih onesnaževal82,84.
Paraformaldehid, natrijev fosfatni pufer (pH 7,4) in vse druge kemikalije, uporabljene v tej študiji, so bile kupljene pri HiMedia Laboratories v Indiji.
Proizvodnja biosurfaktanta je bila izvedena v 500 ml erlenmajericah, ki so vsebovale 200 ml sterilnega medija Bushnell Haas, dopolnjenega z 1% surove nafte kot edinega vira ogljika.Predkulturo Enterobacter cloacae SJ2 (1,4 × 104 CFU/ml) smo inokulirali in gojili na orbitalnem stresalniku pri 37 °C, 200 rpm 7 dni.Po inkubacijskem obdobju smo biosurfaktant ekstrahirali s centrifugiranjem gojišča kulture pri 3400 × g 20 minut pri 4 °C in nastali supernatant uporabili za namene presejanja.Postopki optimizacije in karakterizacija biosurfaktantov so bili sprejeti iz naše prejšnje študije26.
Ličinke Culex quinquefasciatus so bile pridobljene iz Centra za napredne študije morske biologije (CAS), Palanchipetai, Tamil Nadu (Indija).Ličinke so bile vzgojene v plastičnih posodah, napolnjenih z deionizirano vodo pri 27 ± 2 °C in fotoperiodi 12:12 (svetloba:tema).Ličinke komarjev smo hranili z 10% raztopino glukoze.
V odprtih in nezaščitenih greznicah so našli ličinke Culex quinquefasciatus.Za identifikacijo in gojenje ličink v laboratoriju uporabite standardne smernice za razvrščanje85.Larvicidna preskušanja so bila izvedena v skladu s priporočili Svetovne zdravstvene organizacije 86 .SH.Ličinke četrtega stadija quinquefasciatusa so bile zbrane v zaprtih epruvetah v skupinah po 25 ml in 50 ml z zračno režo dveh tretjin njihove prostornine.Biosurfaktant (0–50 mg/ml) smo dodali v vsako epruveto posebej in shranili pri 25 °C.V kontrolni epruveti je bila uporabljena samo destilirana voda (50 ml).Za mrtve ličinke so veljale tiste, ki med inkubacijsko dobo (12–48 ur) niso kazale znakov plavanja 87 .Z enačbo izračunajte odstotek umrljivosti ličink.(1)88.
Družina Odontotermitidae vključuje indijski termit Odontotermes obesus, ki ga najdemo v gnijočih hlodih na kmetijskem kampusu (Univerza Annamalai, Indija).Testirajte to biosurfaktant (0–50 mg/ml) z običajnimi postopki, da ugotovite, ali je škodljivo.Po sušenju v laminarnem zračnem toku 30 minut je bil vsak trak Whatmanovega papirja prevlečen z biosurfaktantom v koncentraciji 30, 40 ali 50 mg/ml.Premazane in nepremazane papirnate trakove smo testirali in primerjali v središču petrijevke.Vsaka petrijevka vsebuje približno trideset aktivnih termitov O. obesus.Kontrolni in testni termiti so dobili moker papir kot vir hrane.Vse plošče so bile ves čas inkubacije shranjene pri sobni temperaturi.Termiti so umrli po 12, 24, 36 in 48 urah89,90.Enačba 1 je bila nato uporabljena za oceno odstotka smrtnosti termitov pri različnih koncentracijah biosurfaktanta.(2).
Vzorci so bili shranjeni na ledu in pakirani v mikroepruvete, ki so vsebovale 100 ml 0,1 M natrijevega fosfatnega pufra (pH 7,4) in poslani v Centralni laboratorij za patologijo ribogojstva (CAPL) Centra Rajiv Gandhi za ribogojstvo (RGCA).Histološki laboratorij, Sirkali, Mayiladuthurai.Okrožje, Tamil Nadu, Indija za nadaljnjo analizo.Vzorce smo takoj fiksirali v 4 % paraformaldehidu pri 37 °C za 48 ur.
Po fazi fiksiranja smo material trikrat sprali z 0,1 M natrijevim fosfatnim pufrom (pH 7,4), postopno dehidriramo v etanolu in 7 dni namočimo v smolo LEICA.Snov nato damo v plastični kalup, napolnjen s smolo in polimerizatorjem, nato pa postavimo v pečico, segreto na 37°C, dokler blok, ki vsebuje snov, ni popolnoma polimeriziran.
Po polimerizaciji smo bloke razrezali z mikrotomom LEICA RM2235 (Rankin Biomedical Corporation 10,399 Enterprise Dr. Davisburg, MI 48,350, ZDA) na debelino 3 mm.Odseki so združeni na prosojnicah, po šest odsekov na prosojnico.Predmetna stekelca smo sušili pri sobni temperaturi, nato 7 minut barvali s hematoksilinom in 4 minute spirali s tekočo vodo.Poleg tega raztopino eozina nanesite na kožo 5 minut in 5 minut sperite s tekočo vodo.
Akutna toksičnost je bila predvidena z uporabo vodnih organizmov iz različnih tropskih ravni: 96-urni LC50 za ribe, 48-urni LC50 za D. magna in 96-urni EC50 za zelene alge.Toksičnost ramnolipidnih biosurfaktantov za ribe in zelene alge je bila ocenjena z uporabo programske opreme ECOSAR različice 2.2 za Windows, ki jo je razvila Agencija ZDA za varstvo okolja.(Na voljo na spletnem naslovu https://www.epa.gov/tsca-screening-tools/ecological-struct-activity-relationships-ecosar-predictive-model).
Vsi testi larvicidne in antitermitne aktivnosti so bili izvedeni v treh izvodih.Nelinearna regresija (log spremenljivk odziva na odmerek) podatkov o smrtnosti ličink in termitov je bila izvedena za izračun mediane letalne koncentracije (LC50) s 95-odstotnim intervalom zaupanja, krivulje odziva koncentracije pa so bile ustvarjene z uporabo Prism® (različica 8.0, GraphPad Software) Inc., ZDA) 84, 91.
Ta študija razkriva potencial mikrobnih biosurfaktantov, ki jih proizvaja Enterobacter cloacae SJ2, kot larvicidnih in antitermitnih sredstev proti komarjem, to delo pa bo prispevalo k boljšemu razumevanju mehanizmov larvicidnega in antitermitnega delovanja.Histološke študije ličink, zdravljenih z biosurfaktantom, so pokazale poškodbe prebavnega trakta, srednjega črevesa, možganske skorje in hiperplazijo črevesnih epitelijskih celic.Rezultati: Toksikološka ocena antitermitne in larvicidne aktivnosti ramnolipidnega biosurfaktanta, ki ga proizvaja Enterobacter cloacae SJ2, je pokazala, da je ta izolat potencialni biopesticid za nadzor vektorskih bolezni komarjev (Cx quinquefasciatus) in termitov (O. obesus).Obstaja potreba po razumevanju temeljne okoljske toksičnosti biosurfaktantov in njihovih potencialnih vplivov na okolje.Ta študija zagotavlja znanstveno osnovo za oceno okoljskega tveganja bioloških površinsko aktivnih snovi.
Čas objave: 9. aprila 2024