Rastlinski in patogeni materiali
Populacijo za kartiranje asociacije sirka, znano kot populacija konverzije sirka (SCP), je zagotovil dr. Pat Brown z Univerze v Illinoisu (zdaj na UC Davis).Opisano je bilo že prej in je zbirka različnih linij, pretvorjenih v neobčutljivost za fotoperiod in manjšo postavo, da bi olajšali rast in razvoj rastlin v okoljih ZDA.V tej študiji je bilo uporabljenih 510 linij iz te populacije, vendar zaradi slabe kalivosti in drugih težav s kontrolo kakovosti niso bile uporabljene vse linije pri analizi vseh treh lastnosti.Končno so bili podatki iz 345 linij uporabljeni za analizo odziva na hitin, 472 linij za odziv flg22 in 456 za odpornost na TLS.B. cookiesev LSLP18 je bil pridobljen od dr. Burta Bluhma na Univerzi v Arkansasu.
Merjenje odziva MAMP
V tej študiji sta bila uporabljena dva različna MAMP, flg22 (katalog Genscript # RP19986) in hitin.Rastline sirka so bile gojene v vložkih, položenih na ravninah, napolnjenih z zemljo (33 % Sunshine Redi-Earth Pro Growing Mix) v rastlinjaku.Rastline smo zalili dan pred odvzemom vzorcev, da bi se izognili dodatni vlagi listov na dan odvzema.
Linije so bile naključno izbrane in iz logističnih razlogov posajene v serijah po 60 linij.Za vsako linijo so bili posajeni trije "lončki" z dvema semenoma na linijo.Naslednje serije so bile posajene takoj, ko je bila prejšnja serija obdelana, dokler ni bila ocenjena celotna populacija.Za oba MAMP sta bili izvedeni dve eksperimentalni seriji z genotipi, ki so bili ponovno randomizirani v vsakem od obeh poskusov.
ROS testi so bili izvedeni, kot je opisano prej.Na kratko, za vsako linijo je bilo šest semen posajenih v 3 različne lončke.Izmed dobljenih sadik smo glede na izenačenost izbrali tri.Sadike, ki so izgledale nenavadno ali so bile znatno višje ali nižje od večine, niso bile uporabljene.Štiri listne plošče s premerom 3 mm smo izrezali iz najširšega dela 4. lista treh različnih 15 dni starih rastlin sirka.En disk na list dveh rastlin in dva diska ene rastline, pri čemer drugi disk postane nadzor vode (glejte spodaj).Diski so bili posamezno flobirani na 50 µl H20 v črni plošči s 96 vdolbinicami, zatesnjeni z aluminijastim tesnilom, da se prepreči izpostavljenost svetlobi, in hranjeni pri sobni temperaturi čez noč.Naslednje jutro smo naredili reakcijsko raztopino z uporabo 2 mg/ml kemiluminiscentne sonde L-012 (Wako, kataloška št. 120-04891), 2 mg/ml hrenove peroksidaze (tip VI-A, Sigma-Aldrich, kataloška št. P6782) in 100 mg/ml hitina ali 2 μM Flg22.50 µl te reakcijske raztopine smo dodali v tri od štirih vdolbinic.Četrta vdolbina je bila lažna kontrola, ki ji je bila dodana reakcijska raztopina brez MAMP.V vsako ploščo so bile vključene tudi štiri slepe vdolbinice, ki so vsebovale samo vodo.
Po dodajanju reakcijske raztopine smo merili luminiscenco z uporabo čitalnika mikroplošč SynergyTM 2 z več detekcijami (BioTek) vsaki 2 minuti 1 uro.Čitalnik plošč izvaja meritve luminiscence vsaki 2 minuti v tej 1 uri.Vsota vseh 31 odčitkov je bila izračunana, da bi dobili vrednost za vsako vdolbinico.Ocenjena vrednost za odziv MAMP za vsak genotip je bila izračunana kot (povprečna vrednost luminiscence treh eksperimentalnih vdolbinic – lažna vrednost vdolbinic) minus povprečna vrednost slepih vdolbinic.Vrednosti slepih vdolbinic so bile dosledno blizu ničle.
Listni diskiNicotiana benthamiana, ena visoko odzivna linija sirka (SC0003) in ena nizko odzivna linija sirka (PI 6069) sta bili prav tako vključeni kot kontrole v vsako ploščo s 96 vdolbinicami za namene nadzora kakovosti.
B. cookiepriprava inokuluma in inokulacija
B. cookieinokulum smo pripravili, kot je opisano prej.Na kratko, sirkova zrna smo tri dni namakali v vodi, splaknili, zajeli v 1L erlenmajerice in avtoklavirali eno uro pri 15psi in 121 °C.Zrna smo nato inokulirali s približno 5 ml maceriranega micelija iz sveže kultureB. cookieLSLP18 izoliramo in pustimo 2 tedna pri sobni temperaturi, pri čemer bučke pretresemo vsake 3 dni.Po 2 tednih so bila zrna sirka, okužena z glivami, posušena na zraku in nato shranjena pri 4 °C do poljske inokulacije.Isti inokulum je bil uporabljen za celotno preskušanje in vsako leto svež.Za inokulacijo smo 6–10 okuženih zrn dali v kolobarje 4–5 tednov starih rastlin sirka.Spore, proizvedene iz teh gliv, so v enem tednu sprožile okužbo mladih rastlin sirka.
Priprava semena
Pred sajenjem na njivo je bilo seme sirka tretirano z mešanico fungicidov, insekticidov in varoval, ki je vsebovala ~ 1 % fungicida Spirato 480 FS, 4 % fungicida Sebring 480 FS, 3 % varovala za seme Sorpro 940 ES.Nato so semena 3 dni sušili na zraku, kar je zagotovilo tanek premaz te mešanice okoli semen.Varovalo je omogočilo uporabo herbicida Dual Magnum kot tretiranje pred vznikom.
Ocena odpornosti proti ciljni listni pegavosti
SCP je bil posajen na Central Crops Research Station v Claytonu, NC, 14.–15. junija 2017 in 20. junija 2018 v randomiziranem celotnem bloku z dvema poskusnima ponovitvama v vsakem primeru.Poskusi so bili posajeni v 1,8 m enovrstnih vrstah s širino vrste 0,9 m z uporabo 10 semen na parcelo.Dve mejni vrsti sta bili posajeni okoli oboda vsakega poskusa, da bi preprečili robne učinke.Poskusi so bili cepljeni 20. julija 2017 in 20. julija 2018, ko so bile rastline sirka v stopnji rasti 3. Ocene so bile narejene na lestvici od ena do devet, kjer so bile rastline, ki niso kazale znakov bolezni, ocenjene z devet in popolnoma mrtve rastline so bile ocenjene kot ena.Leta 2017 sta bili opravljeni dve oceni, leta 2018 pa štirje odčitki, ki so se vsako leto začeli dva tedna po inokulaciji.sAUDPC (standardizirana površina pod krivuljo napredovanja bolezni) je bila izračunana, kot je opisano prej.
Čas objave: Apr-01-2021